NobleRyder DNA退火緩沖液(5×) 即用型試劑
NobleRyder DNA退火緩沖液(5×) 即用型試劑NobleRyder DNA退火緩沖液(5×) 即用型液體試劑N6822-1ml
DNA退火緩沖液(5×)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡(jiǎn)稱為DNA退火緩沖液，是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規(guī)的DNA oligo的退火，尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。由于RNAi質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo通常由于含有約20個(gè)左右的互補(bǔ)序列，自身易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，從而影響兩條DNA oligo的正確退火。
NobleRyder Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽(yáng)性克隆。該本試劑操作簡(jiǎn)單，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫，約90min即可完成。
NobleRyder DNA退火緩沖液(5×) 即用型試劑
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | N6822 | Storage |
試劑(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 1ml | -20℃ |
試劑(B): Nuclease-Free Water | 5ml | RT |
使用說(shuō)明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
1、 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的超純水或Nuclease-Free Water配制成50μM，同時(shí)溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混勻備用
2、 按如下退火反應(yīng)體系操作：
N uclease-Free Water | 40μl |
Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 20μl |
DNA oligo A(50μM) | 20μl |
DNA oligo B(50μM) | 20μl |
Tatal | 100μl |
按照上述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒(méi)有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止液體揮發(fā)。
3、 按如下PCR儀的退火條件：
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 作用 |
1 | 95℃ | 2min | Oligo充分變性 |
2 | 每90s下降1℃，降至25℃ | 約90min | 程序退火 |
3 | 4℃ | 長(zhǎng)期保存 | 暫時(shí)存放 |
4、退火后可直接用于連接反應(yīng)，也可以-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，最好用純化試劑盒進(jìn)行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過(guò)5%，以避免Annealing Buffer對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。
注意事項(xiàng)：
1.避免反復(fù)凍融，以免效率下降。
2.該試劑只適合于DNA oligo的退火，不適用于RNA oligo 的退火。
3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期： 12個(gè)月有效。
NobleRyder DNA退火緩沖液(5×) 即用型試劑
