Percoll分層液屬于Perco，是經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮 (polyvinyl pyrolidone, PVP) 處理的硅膠顆?；鞈乙海瑸閘l分層液。
Percoll是經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮 (polyvinyl pyrolidone, PVP) 處理的硅膠顆?；鞈乙?，對細(xì)胞無毒性和刺激性。Percoll混懸液的硅膠顆粒大小不一，經(jīng)過高速離心后，可形成一個(gè)連續(xù)密度梯度，將比重不同的細(xì)胞分離純化。
將1份10XPBS與9份Percoll貯存液混合，制成等滲Percoll懸液，此懸液被認(rèn)為是99.99%Percoll懸液，其密度為1.1294g/ml。用PBS或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋99.99%Percoll而獲得所需密度的Percoll分離液用于相應(yīng)細(xì)胞的分離。若分離淋巴細(xì)胞應(yīng)使用1.0777g/ml，配制時(shí)用稀釋液稀釋60%即可。
取比重1.077的Percoll分離液X ml與離心管中，將等倍稀釋的抗凝血1/2 X ml 小心疊加在分離液上，經(jīng)水平離心(1500rpm)后，便得四個(gè)細(xì)胞層，從而分離出淋巴細(xì)胞。表層為死細(xì)胞殘片和血小板，底層為粒細(xì)胞和紅細(xì)胞，中間有兩層，上層富含單核細(xì)胞，下層富含淋巴細(xì)胞。
Percoll的優(yōu)點(diǎn)分析
該法是純化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的一種較好的方法，淋巴細(xì)胞純度高達(dá)98%，單核細(xì)胞純度可達(dá)78%。
因?yàn)镻ercoll具有滲透性低、不穿透細(xì)胞、粘度低、密度高和無毒害等優(yōu)點(diǎn)，與目前常用的密度梯度離心介質(zhì)，包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serum albumin, ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化銫(CsCl)等相比，是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離，純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動物細(xì)胞。這一技術(shù)也開始用于用于分離和純化植物原生質(zhì)體、核、葉綠體和線粒體。
